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[導讀]流式細胞分析技術在現(xiàn)代細胞分子生物學研究中起著越來越重要的作用,這種分析技術是通過對單個細胞性狀的快速測定,并結(jié)合先進的計算機分析系統(tǒng),使得在短時間內(nèi)可對大量細胞進行定性、定量測定。但以往進行流式細胞

流式細胞分析技術在現(xiàn)代細胞分子生物學研究中起著越來越重要的作用,這種分析技術是通過對單個細胞性狀的快速測定,并結(jié)合先進的計算機分析系統(tǒng),使得在短時間內(nèi)可對大量細胞進行定性、定量測定。但以往進行流式細胞儀操作和分析需要技術熟練的研究團隊,而且這一設備價值也不菲——起碼也要10萬美元,有些甚至達到50萬美元,這對于許多實驗室來說并不容易負擔。

近年來一些主流生物技術企業(yè)相繼推出了新型流式細胞儀,讓這一技術變得更加容易操作,也更加實惠了。目前的流式細胞儀分析系統(tǒng)設置大部分都是自動化的,相關試劑盒也經(jīng)過了多次驗證,簡化了操作,降低了入門門檻。一些大型的公司,比如Sony和BD加大了研發(fā)力度,開發(fā)出了10萬美元以下的流式細胞儀,客戶群由中心實驗室轉(zhuǎn)向了個體研究人員。但是這些新型的流式細胞儀也不是說就能立即上手的,用戶在購買之前要弄清楚這一技術到底能做什么,不能做什么,有時實驗室購買了流式細胞儀后覺得又不適用了,這樣即浪費資源,也耽誤時間,因此了解自己需要什么,了解不同儀器的優(yōu)缺點十分重要。以下是目前市面上較受關注的幾個新型流式細胞儀,通過分析它們的優(yōu)點和缺點,也許您在選購的時候就更有目的性了。

Attune Acoustic Focusing Cytometer

這是一款由美國能源部國家實驗室(洛斯阿拉莫斯國家實驗室)研制的新型流式細胞分析儀,去年春天由ABI(Life Technologies)公司投入到了市場,是市場上第一臺用聲波精確控制細胞移動的流式細胞計數(shù)系統(tǒng),榮獲了2010年生物通生命科學十大創(chuàng)新產(chǎn)品稱號,以及The Scientist雜志2010十大創(chuàng)新技術稱號。

流式細胞儀的原理在于讓細胞穿過激光檢測設備,從而使科學家們得以對細胞進行計數(shù)和檢測,這一儀器的技術關鍵在于其靈敏分辨率和樣品進樣分析速度,在此之前,研究人員必須在兩者之間二選一,取其平衡點,而Attune聲波聚焦原理的流式細胞儀的誕生解決了這個矛盾,研究人員能夠同時將速度和分辨率最大化,并在檢測點開展cell-by-cell的細胞分析。聲波聚焦的使用也增加了樣品量,達到1mL/分鐘,而目前市場上最快的傳統(tǒng)流式細胞儀也只有160 μL/分鐘,這讓用戶能更有效地分析相對稀釋的樣品,比如干細胞,因為樣品中的顆粒能在檢測點濃縮。另外Attune聲波聚焦流式細胞儀是405nm紫色激光和488nm藍色雙激光設計,其中紫色激光要比其它一些經(jīng)濟型流式細胞儀中用到的標準激光馬力更大,目前Life Technologies也針對這一儀器推出了優(yōu)化探針,更有利于研究人員實驗操作。

Attune聲波聚焦流式細胞儀可幫助科學家們實現(xiàn)對細胞群體中大量異質(zhì)細胞進行統(tǒng)計學數(shù)據(jù)的采集,以便研究包括大小、復雜性、表型和健康情況在內(nèi)的細胞群體參數(shù)。Attune的專利技術可讓科學家們獲得更高的靈敏度,通過增加通量來節(jié)約時間,并可用于體積小的樣品。除此之外,Attune在提供這些升級性能的同時,還憑借緊湊的聲學技術而實現(xiàn)了體積小,以及開展實驗所需的消耗品量更少等優(yōu)勢。這些獨特的特征將有助于實現(xiàn)傳統(tǒng)細胞儀系統(tǒng)所無法實現(xiàn)的科研應用,從樣品分離制備到微珠為基礎的樣品分析。但是也要注意的是,Attune聲波聚焦流式細胞儀并沒有安裝紅色激光——這是一些用戶比較喜歡的光源。而且在一些常用的流式細胞分析過程中,樣品都是高濃度,低體積的,如果用Attune,還要購買價格稍貴的tag,可能劃不來。

購買流式細胞儀注意事項:

明確目的:在購買流式細胞儀之前要考慮清楚自己的實驗目的,這些新型流式細胞儀并不是萬能的,比如說如果想要檢測亞微分辨率的微粒,這些低端的儀器就都不合適。就熒光檢測而言,有研究人員就認為這些經(jīng)濟實惠的新型流式細胞儀在分辨模糊昏暗的細胞群體方面,不如那些貴一點的流式細胞儀,比如BD的FACSCanto II、BD LSR II,以及Beckman Coulter Gallios,假如您需要研究分析磷酸化受體和未磷酸化受體的話,可能就要重新考慮流式細胞儀的選擇了。

想想5年后的情況:要考慮清楚:需要分析多少樣品,進行怎樣的實驗?預期的參數(shù)是多少?在未來的實驗中研究需求的數(shù)量和復雜性是否會增加?是否有可能升級到你想要的儀器?如果這些儀器不能滿足未來實驗的要求,也許還是應該選擇在中心實驗室中進行實驗。

費用總計:進行流式細胞實驗所需要的花費并不僅僅是指花在試劑盒,過濾器,其它耗材上的錢,還有零件的更換,以及安裝這些零件花費的時間。一臺EasyCyte流式細胞儀細心維護,半年也需要400美元,一些傳統(tǒng)的流式細胞儀更是要花費上千。除此之外還有服務費用。

儀器檢測:如果已經(jīng)下決心購買流式細胞儀了,那么可以聯(lián)系中心實驗室,詢問是否有這種儀器的演示實驗,一些中心實驗室都會召集一些研究人員在樣板機器中進行常見的實驗操作,并分析這些結(jié)果與其它儀器結(jié)果的區(qū)別。如果不能到中心實驗室中檢測,那么可以在實驗室中自己檢測,看看機器的使用和維護情況。

自我培訓:隨機一般都有軟件,但是這并不是說在實驗過程中,就不會把熒光背景當作一個假陽性信號,因此研究人員還是需要花些時間進行流式細胞分析培訓的。有些免費的在線課程,以及相關的各領域資料,比如干細胞生物學等,當然更好的是能找到專家咨詢,許多研究機構都有一些免費的短期課程,大家可以多多留意。

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